การเปรียบเทียบสารสกัดแอนโทไซยานิน (Anthocyanin) จากมะม่วงหาวมะนาวโห่ และ ลูกหม่อนในการยับยั้งเชื้อแบคทีเรีย Escherichia coli และ Staphylococcus aureus
- ชื่อนักเรียนผู้จัดทำโครงงานวิทยาศาสตร์
สุภัสสรา เก้าเอี้ยน, ธัญญารัตน์ หนูทอง
- อาจารย์ที่ปรึกษาโครงงานวิทยาศาสตร์
จุฬาลักษณ์ ตุลยกุล, ประกอบกิจ แหลมม่วง
- โรงเรียนที่กำกับดูแลโครงงานวิทยาศาสตร์
- ปีที่จัดทำโครงงานวิทยาศาสตร์
บทคัดย่อโครงงานวิทยาศาสตร์
การจัดทำโครงงาน เรื่อง การเปรียบเทียบสารสกัดแอนโทไซยานิน (Anthocyanin) จากมะม่วงหาวมะนาวโห่และ ลูกหม่อนในการยับยั้งเชื้อแบคทีเรีย Staphylococcus aureus และ Escherichia coli วัตถุประสงค์คือ 1. เพื่อศึกษาวิธีการสกัดสารแอนโทไซยานินจากมะม่วงหาวมะนาวโห่และลูกหม่อน 2. เพื่อเปรียบเทียบประสิทธิภาพในการยับยั้งเชื้อแบคทีเรีย S.aureus และ E.coli ของสารแอนโทไซยานินจากมะม่วงหาวมะนาวโห่และหม่อน 3. เพื่อต่อยอดในการใช้สารแอนโทไซยานินเพื่อต่อต้านสารต้านอนุมูลอิสระ โดยสมมติฐานการทดลองว่า 1. สารแอนโทไซยานินในหม่อนมีประสิทธิภาพในการยับยั้งเชื้อ S.aureus และ E.coli ได้ดีกว่ามะม่วงหาวมะนาวโห่ 2. สกัดสารแอนโทไซยานินจากมะม่วงหาวมะนาวโห่ และ ลูกหม่อน มาเป็นยาสมุนไพรรักษาอาการเบื้องต้นของโรคท้องร่วง และวิตามินต่อต้านอนุมูลอิสระได้วิธีการทดลอง นำผลมะม่วงหาวมะนาวโห่และผลหม่อนสกัดได้ ด้วยวิธี pH differential method คือใช้ผลมะม่วงหาวมะนาวโห่และผลลูกหม่อนไปอบให้แห้งด้วยตู้อบที่อุณหภูมิ 45°C เป็นเวลา 12 Hr จนได้ผลมะม่วงหาวมะนาวโห่และผงลูกหม่อนขนาด อนุภาคอยู่ในช่วง 1-150 μm เติมอะซิโตนและนำไปจุ่มใน Ultrasonic Bath ด้วยความถี่ 38.5 kHz เป็นเวลา 30 min นำไปกรองและนำสารละลายเขย่าสารละลายให้เข้ากันโดยที่แยกสารและวิเคราะห์หาปริมาณสารแอนโทไซยานินทั้งหมดโดยใช้วิธี pH differential method ตั้งทิ้งไว้ในที่มืดที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 min และคำนวณหาปริมาณแอนโทไซยานินการประเมินฤทธิ์ต้านเชื้อ E. coli และ S.aureus ทำการเลี้ยงเชื้อและต้มให้เดือดจนวุ้นทิ้งไว้ให้เย็นที่อุณหภูมิ 45-50o C ทำการเพาะเลี้ยงเชื้อแบคทีเรีย S. aureus และ E. coli บนอาหารเลี้ยงเชื้อ Nutrient agar แล้วนำไปบ่มที่อุณหภูมิ 35°C เป็นเวลา 18 Hr เพื่อเลี้ยงเชื้อให้ได้โคโลนีเดี่ยว ๆ นำไปบ่มต่อ และปรับเติมให้มีความขุ่นที่เหมาะสม ทำการเจือจางต่อด้วยการเติมส0.85% โซเดียมคลอไรด์โดยเจือจางให้ความเข้มข้นลดลงทีละ 10 เท่า จนถึงประมาณ 105-107 cell/mL การทดสอบฤทธิ์เบื้องต้นในการต้านเชื้อ S. aureus และ E. coli โดยวิธี Disc diffusion assay การเตรียมสารสกัด Positive control และ Negative control ชั่งสารสกัดแอนโทไซยานิน ใส่ในหลอดปั่นเหวี่ยงขนาด 1.5 mL เติมเมทานอลปริมาตร 100 μL แล้วใช้เรื่องอัลตราโซนิกเพื่อช่วยควบคุมในการละลายให้สารสกัดละลายได้มากที่สุด โดยใช้เมทานอลหยดลงบน paper disc การทดสอบฤทธิ์เบื้องต้นโดยนำจานอาหารเลี้ยงเชื้อแข็ง(Mueller Hinton Agarplate) เข้าอบนาน 30 min โดยการใช้เทคนิคปลอดเชื้อ(Aseptic technique) จดบันทึกค่า MBC หรือความเข้มข้นของสารสกัดที่สามารถฆ่าเชื้อได้จากจานอาหารเลี้ยงเชื้อที่ไม่มีการเจริญเติบโตของเชื้อแบคทีเรียแล้ว การหาความเข้มข้นต่ำสุดที่สามารถยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อ S. aureus และ E. coli โดยวิธี Broth dilution technique การเตรียมสารสกัดโดยเตรียมหลอดทดลองที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้วจำนวน 10 หลอด เตรียมสารสกัดให้มีความเข้มข้นสุดท้ายเป็น 200 mg/mL โดยได้ผลการทดลองความเข้มข้นของสารสกัดในหลอดที่ 1-9 มีค่าลดลงเรื่อยๆจนหลอดที่ 10 ความเข้มข้นของสารสกัดเท่ากับศูนย์จึงใช้เป็น Positive control แล้วเติมเชื้อแบคทีเรียลงไปในทุกหลอด หลอดละ1 mL บ่มเลี้ยงเชื้อแบคทีเรีย 24 Hr สังเกตความขุ่นของเชื้อแต่ะละหลอดเปรียบเทียบกับ Positive control ทำเพิ่มอีก 3 ครั้ง บันทึกหลอดที่ไม่มีความขุ่นจะได้ค่า MIC ผลจากทดลองพบสารสกัดแอนโทไซยานินในลูกหม่อนนั้นสามารถยับยั้งเชื้อแบคทีเรียได้ดีกว่าในมะม่วงหาวมะนาวโห่